在Elisa试剂盒中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在elisa板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
 

　　在ELISA实验中，ELISA试剂盒是十分重要的存在，为了减少误差的产生，接下来先来了解一下ELISA试剂盒冷冻后质量会受哪些因素的影响。
 

　　为其保存后可以使用，ELISA试剂盒不能反复冻融，如果您在一周之内做实验，可以2-8℃保存；如果您在一周至一个月之内做实验，可以-20℃保存；如果您在一个月以上做实验，可以-80℃保存。但是值得注意的是，冻融一次比2-8℃保存损失更大，主要是因为蛋白的降解，冻融一次蛋白都有降解。
 

　　在建立ELISA方法作反应动力学研究时，实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1～2小时，产物的天生可达较高。温育常采用的温度有43℃、37℃、室温4℃等。室温温育时平置于操纵台上即可。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。保温的方式除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均采用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度迅速平衡。操纵时的室温应严格限制在划定的范围内，尺度室温温度是指20～25℃，但详细操纵时可根据仿单的要求控制温育。