鼠抗人白细胞特异性单克隆抗体操作步骤:

1 . 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行

⒉ 缓冲液洗  3min/2  次。

⒊ 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在  Hydrogen Peroxide Block  中孵育  10-15  分钟。

⒋ 缓冲液洗  5min/2  次。

⒌ 滴加  Ultra V Block  , 在室温下孵育  5  分钟以封闭非特异性的背景染色。

(注:孵育不要超过  10  分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有  5  -  10%  正常羊血清,这一步可以省略。)

⒍ 缓冲液洗  5min/2  次。

⒎ 滴加一抗工作液  37  ℃孵育  1  -  2  小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)

⒏ 缓冲液洗  5min/2  次。

9  . 滴加  Primary Antibody Enhancer (增强子),在室温下孵育  20  分钟。

10  .缓冲液洗  5min/2  次。

11  .滴加  HRP Polymer (酶标二抗) ,在室温下孵育  30  分钟。

(注: HRP Polymer  对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)

12  .缓冲液洗  5min/2  次。

13  .向  1ml DAB Plus Substrate  (或  AEC Plus Substrate)  中滴加  1-2  滴  DAB Plus Chromogen  (或  AEC Plus Chromogen ),混匀后滴加到切片上,孵育  3  -  15  分钟。(具体时间由染色深浅决定。)

14  .自来水充分冲洗,复染 ,脱水,透明,封片。