1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。
细辛醛英文名称:Asarylaldehyde:14374-62-0分子式:196.19988
仙茅苷英文名称:Cents a:85643-19-2分子式:466.44
相思豆碱 英文名称:Acacia base:21339-55-9分子式:218.25
香蒲新苷英文名称:Typhaneoside:104472-68-6分子式:770.68528
香叶木素英文名称:Diosmetin:520-34-3分子式:300.26
小豆蔻明英文名称:Adzuki beans Kou Ming:19309-14-9分子式:207.28
辛弗林英文名称:Synephrine:1994/7/5分子式:167.20502
辛可尼丁英文名称:Sin Coenen Martin:485-71-2分子式:294.39
辛可宁英文名称:Xin Kening:118-10-5分子式:294.39
辛夷脂素英文名称:Fargesin:31008-19-2分子式:370.39578
新绿原酸英文名称:Neochlorogenic acid:906-33-2分子式:354.31
新芒果苷英文名称:New mango:64809-67-2分子式:584.48022
雄烯二酮英文名称:Two ketones:1963/5/8分子式:286.40854