白介素2 ELISA试剂盒的标准化操作流程与注意事项全解析
点击次数:5 更新时间:2025-04-26
白介素2 ELISA试剂盒在检测白介素2的含量方面具有重要应用,以下为你详细介绍其标准化操作流程与注意事项。
一、操作流程
1.实验准备
准备实验所需的各种器材、试剂等,确保试剂盒在有效期内,且试剂储存条件符合要求。
将试剂盒平衡至室温,一般需30分钟。
2.样本处理
对待检测样本进行适当处理,如血清样本需充分离心去除杂质,细胞培养上清需经过过滤除菌等。
3.加样
在微孔板的相应孔中分别加入标准品、质控品和样本,每孔200μL,注意避免交叉污染。轻轻振荡反应板,使样品充分混匀。
4.孵育
将反应板置37℃温箱中孵育1小时,让样本与包被的抗体充分结合。
5.洗涤
每孔加入350μL洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤3次,较后在滤纸上拍干。
6.加酶标物
每孔加入酶标物100μL,37℃温箱孵育30分钟。
7.显色与检测
加入显色剂A、B液各50μL,37℃避光显色15分钟。接着加入50μL终止液,15分钟内用酶标仪在450nm波长处测定OD值。
二、注意事项
1.操作过程要严格遵循无菌原则,防止样本污染。
2.加样时务必准确,注意每一孔的添加量和对应关系。
3.洗涤环节要完整,确保去除多余的底物和杂质,但又不能过度洗涤致使抗体丢失。
4.不同试剂盒的孵育时间和温度可能会略有差异,需严格按照试剂盒说明书执行。
5.检测过程中应尽量避免强光直射,以防止OD值异常。
只要严格按照标准化流程操作并注意相关事项,就能运用白介素2 ELISA试剂盒获得准确可靠的检测结果。