.摇瓶培养

    筛选的全过程都要通过摇瓶培养。摇瓶培养是通过摇床振荡，使菌体与培养基和空气充分接触而获得营养和氧气。摇瓶培养的优点是培养条件与发酵罐接近，这样选育出来的菌株容易推广到大中去。ELISA试剂盒

    摇瓶培养通常可分为初筛和复筛。初筛由于菌株较多，常一个菌株接一个摇瓶，进行振荡培养，培养结束后逐个进行活性测定，将能力高的菌株用砂土管或冷冻管保藏。待初筛结束后，再将砂土管或冷冻管菌种接人斜面，进一步进行摇瓶复筛．此时一个菌株要接3～5个摇瓶，以提高性。

    选育高产菌种的zui终目的是要应用到上去，因此，摇瓶的培养条件要尽量与发酵罐接近。

    摇瓶筛选实际上是各菌株之间的对比试验，因此，有关摇瓶培养的各种条件要力求一致，如摇瓶型号、装量、瓶塞厚度或瓶El包扎纱布的层数、摇床转速、温度等。

2.产物活性测定

    产物活性测定是菌种筛选的重要组成部分，也是决定筛选数量的主要因素之一。一般来说，初筛的菌株数越多，就越有可能筛选到优良菌株。因此扩大筛选量是提高育种效率的一个重要方面，在筛选工作中建立一个简便、快速而又较准确的检测方法也就显得十分重要了。下面介绍几种在摇瓶初筛中常用的快速测定代谢产物的方法。

()琼脂平板孔洞法 以代谢产物为酶类的突变株的筛选为例。将一定量的底物和琼脂做成厚约3mm的平板，待凝固后，用直径5mm的打孔器取出琼脂块，使平板上留下50～60个圆孔。然而加入过滤或离心后的发酵液IOF．L，置于底物作用的温度下，培育20~25h，在孔洞周围出现水解圈。根据水解圈的大小和清晰度决定取舍。ELISA试剂盒

(2)纸片法取直径为0．5cm的圆形滤纸片，灭菌后覆盖于含有底物或检定菌的琼脂板上，吸取～2pL发酵液于滤纸上，置一定温度下培养一定时间，测定水解圈或抑菌圈的大小。

(3)琼脂薄层纸片法琼脂薄层纸片法适合于抗真菌抗生素和农用抗生素产生菌的初筛，是一种与生物相关性较强的初筛方法。它是一种符合大量菌株和以多种产孢子的真菌、病原菌为对象的综合筛选方法。

    制备病原菌的孢子悬液，加入到45~50℃的真菌培养基中，混匀，倾人到玻璃板上，均匀摊平，制成约cm厚的薄层琼脂板。将圆形滤纸片覆于薄层琼脂上，加入～2μL发酵液，编号。在玻璃板两端各放上一块条状的玻璃作为垫子，上面盖一块灭菌过的玻璃板。放入搪瓷盘内，置适宜的温度下培养。置于解剖镜或立体显微镜下观察孢子萌发、菌丝形态，并测量抑菌圈大小。

3.摇瓶数据的调整和有关菌株特性的观察分析

    摇瓶试验的测定数据是否准确直接关系到高产菌株的筛选频率。摇瓶试验的误差来自两个方面：一是摇瓶条件的不一致；二是检测过程的误差。对摇瓶发酵液的测试数据要尽量用生物统计方法来处理，以便在复杂的数据中去伪存真，抓住本质。在分离、筛选和整个试验过程中，每个阶段都要周密地观察菌株特性。ELISA试剂盒

4.培养基和培养条件的优化

    高产表型是由基因型和环境相互作用共同决定的，通过诱变育种得到的高产菌株具有高产基因型，但出发菌株的培养基和培养条件对高产菌株来说并非。因此，高产菌株选育之后，需对高产菌株的培养基和培养条件进行优化，以充分发挥高产菌株的高产潜力。可用单因子法、正交试验法、均匀设计、响应面法等方法进行培养基和培养条件优化。