（一）马来酰亚胺类

    巯基作为备选的交联基团具有以下优点：交联位点确定，交联反应可逆，可以实现顺序交联反应。马来酰亚胺可在 pH6.5--7.5的条件下与巯基发生特异性反应形成稳定的巯醚键。中性 pH值条件下，马来酰亚胺与巯基反应的速率快于氨基000倍。但是pH大于8.5时，反应更倾向于氨基。马来酰亚胺不与、和发生反应。马来酰亚胺在溶液中也会发生水解反应，尤其是在pH值大于8.0的条件下。水解反应会与巯基交联反应发生竞争。反应溶液中应该避免自由巯基的存在。同样，巯基化合物也可用于马来酰亚胺交联反应的终止。反应缓冲体系中添加 EDTA可以避免巯基的氧化。ELISA试剂盒

（二）卤乙酰基类

    zui为常用的α-卤乙酰基类交联剂含有可以在生理pH值条件下与巯基反应的卤乙酰基团。为保证巯基反应的特异性，通常选择pH8.5条件，并且卤乙酰基交联剂轻微过量。卤乙酰基交联剂大量过量会与其他氨基酸发生非特异性反应。咪唑可以与卤乙酰基类在pH6.9耀7.0条件下发生反应，但是反应孵育时间必须超过一周。ELISA试剂盒

    为抑制游离碘的生成，卤乙酰基交联反应应该闭光进行，因为游离卤素可以与、和残基发生反应。常用的NHS酯卤乙酰基双官能团交联剂包括SIA、SIAB和硫化SIAB等。

（三）二硫代联吡啶

    二硫代联吡啶可与巯基在较宽pH值范围内发生反应形成二硫键，pH值为4--5。由于反应后产生2-硫吡啶，因此可以通过检测其在343nm的吸光度值判断反应进行的程度。常用的二硫代联吡啶类交联剂包括LC-SPDP、硫化LC-SPDP和PDPH。

（四）酰肼类

    羰基化合物（醛酮类）可与酰肼和氨基在pH5耀7的条件下反应，与酰肼的反应速度快于氨基。此类交联剂可以用于位点特异性的交联反应。蛋白质分子中所含有的羰基并不是十分稳定，但是多糖链经高碘酸钠轻度氧化后会经邻近的羟基氧化成为醛基或酮基。通常此类氧化反应都是在闭光0--4℃条件下进行的，以此避免副反应的发生。随后添加酰肼就可以形成腙键。此种交联反应主要用于抗体的修饰方面，因为抗体的Fc段通常含有碳水化合物。0℃，mmol/L高碘酸钠条件下，氧化反应于唾液酸残基。如果浓度提高到6耀0mmol/L水平，那么蛋白分子中的其他碳水化合物也可以参与反应。

（五）碳二亚酰胺类

    碳二亚酰胺可以介导羧基与氨基或酰肼的反应，生成酰胺键或腙键。由于蛋白的末端及侧链通常都含有羧基和氨基，所以使用此类交联剂会造成蛋白多聚体的形成。所形成的共价键类似于蛋白分子的肽键，所以是十分稳定的，如果不破坏蛋白是不可能打开形成的交联键的。ELISA试剂盒

    EDC〔-乙基-3-（3-二甲基氨丙基） -碳二亚胺〕是此类交联剂中使用的一种，在半抗原的合成和酶的修饰中使用较多。其机制一般认为是蛋白残基的羧基先同EDC反应，生成活泼的中间产物O-酰基异脲（O-acylisourea），这个中间产物再与亲核基团，如氨基或羟基，发生反应。