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沉淀反应技术
点击次数:1086 更新时间:2016-02-17

一、 概述

    可溶性抗原(如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等)与其相应的抗体相遇后,在电解质参与下,抗原抗体结合形成白色絮状沉淀,出现白色沉淀线,此种现象称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原(precipitinogen),与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素(precipitin)。沉淀反应的发生机制与凝集反应基本相同。不同之点是:沉淀原分子小,单位体积内总面积大,故在定量试验时,通常稀释抗原。

    沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。

    环状沉淀反应是zui早的沉淀反应,目前在链球菌的分类、鉴定,昆虫吸血性能及所吸血液来自何种动物的鉴别,肉品种属鉴定及炭疽尸体与皮张的检验工作中仍然应用。主要是用已知的抗体诊断未知的抗原。

    絮状沉淀反应是将抗原与血清在试管内混合,在电解质存在的情况下,抗原抗体复合物可形成混浊沉淀或絮状沉淀凝聚物,此法通常用于毒素与抗毒素的滴定。

    琼脂凝胶免疫扩散(Agar-gel immunodiffusion)是沉淀反应的一种形式,是指抗原抗体在琼脂凝胶内扩散,特异性的抗原抗体相遇后,在凝胶内的电解质参与下发生沉淀,形成可见的沉淀线。这种反应简称琼脂扩散。

    抗原抗体扩散使用的凝胶种类很多,除琼脂外还有明胶、果胶、聚丙烯酰胺等,因此总的名称叫免疫扩散(Immunodiffusion 简写为ID)。琼脂扩散是免疫扩散中的一种方法。

    琼脂扩散的原理是:物质自由运动形成扩散现象,扩散可以在各种介质中进行。我们所使用的%~2%的琼脂凝胶,琼脂形成网状构架,空隙中是 98%~99%的水,扩散就在此水中进行。%~2%琼脂所形成的构架网孔较大,允许分子量在20万以下甚至更大些的大分子物质通过,绝大多数可溶性抗原和抗体的分子量在20万以下,因此可以在琼脂凝胶中自由扩散,所受阻力甚小。二者在琼脂凝胶中相遇,在zui适比例处发生沉淀,此沉淀物因颗粒较大而不扩散,故形成沉淀带。

    一种抗原抗体系统只出现一条沉淀带,复合物抗原中的多种抗原抗体系统均可根据自己的浓度、扩散系数、zui适比等因素形成自己的沉淀带。本法的主要优点是能将复合的抗原成分加以区分,根据沉淀带出现的数目、位置以及相邻二条沉淀带之间的融合、交叉、分枝等情况,就可了解该复合抗原的组成。

二、环状沉淀反应

    以炭疽环状沉淀反应为例,此反应又称Ascoli氏反应。

(一)材料与试剂

.已知炭疽沉淀血清,购买自生物制品所。

2.待测炭疽沉淀抗原

3.试管5mm×50mm、滴管

4.0.3%石炭酸生理盐水

(二)操作方法

.待测抗原的提取

()取可疑为炭疽而死的病畜的实质脏器g,放入试管或小三角烧瓶中,加生理盐水5ml~0ml,煮沸30min~40min,冷却后用滤纸过滤得清澈的液体,即为待测抗原。

(2)如病料是皮张,可采用冷浸法。将样品高压灭活后,剪成小块并称重,加约5倍的0.5%生理盐水,室温浸泡8h~24小时,滤纸过滤,即为待检抗原。抗体

 

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