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总结ELISA试剂盒实验中的失误
点击次数:769 更新时间:2016-05-26
   .实验人员应掌握实验室基本操作具备基本素质和具有一定的实践经验。可以熟练使用实验仪器、器械,善于总结和分析问题,对于实验中出现的意外情况能稳重妥善解决。
  2.在操作前必须仔细阅读说明书,严格按照说明书要求进行规范操作,不同批号的试剂千万不能混用。在反复试验确定成立后方可改进。
  3.必须严格控制反应时间,如果反应时间过长,酶会失有可能造成假阴性。
  4.评估试剂的实用性,试剂是否稳定,对准确率的高低到头重要。在使用试剂前,应进行阴、阳对照及样品反复比照试验,判定试剂符合要求后方可使用。
  5.使用校对过的微量移液器可以排除自然误差,移液器准确与否对定量检测尤为重要。
  6.加样不仅要做到快速也必须保证准确。如若加样不准确,酶生成物的量不能确定直接影响显色结果。显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关,所以加样需慎重。如果加样迟缓会出现误差,如果试剂长时间暴露在外,尤其室温过高时,保存期会缩短甚至失效。
  7.严格掌握显色时间,如若显色时间过短加入终止液反应终止后底物结合物的量过少,易出现假阴性。超过显色要求时间后显色,应判为假阳性,这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色,不可报阳性,这可能是本底显色的结果。
  8.洗涤一定要*,如果洗板不*,酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外需要注意洗涤液要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能会出现假阳性。

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