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学习elisa试剂盒的判定方法和检测说明
点击次数:892 更新时间:2016-07-15
   elisa试剂盒判定结果方法
  .定量测定结果按照尺度曲线计较样品中待测物的含量。
  2.目测定性法:参加底物经酶解和终止反响后,肉眼察看阳性孔颜色明显深于(竞争法例浅于)阴性比较;与阴性比较的颜色靠近者,断定为阴性。
  3.以样品孔的OD值大于阴性比较OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
  4.以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或即是2.为阳性;P/N值小于2.,但大于.5为可疑;P/N小于.5为阴性。
  elisa试剂盒检测说明
  、试剂
  ()5%与2.5%PEG用0.02mol/LpH7.4PBS配制;
  (2)牛血清白蛋白(BSA)缓冲液:用0.05mol/LpH7.4PBS配制。含0.0mol/LEDTA、0.%硫柳汞、0.05%Tween20及4%BSA;
  (3)HRP-SPA用改良过碘酸钠法将SPA与辣根过氧化物酶(HRP)制成结合物,zui适工作浓度以方阵法滴定;
  (4)热聚合人IgG:人IgG0mg/ml,63℃加热20min制成。
  2、把持步伐
  ()用PBS稀释SPA成5Ps/ml,包被聚苯乙烯反应板微孔,每孔0.ml( 比力孔不包被),置4℃ 过夜后洗涤3次备用;
  (2)待测血清0.05ml加PBS0.5ml和5%PEG0.2ml混匀,4℃ 过夜后600r/min离心20min,弃上清,沉淀用2.5%PEG洗2次,加入PBS0.2ml和BSA缓冲液0.2ml,混匀,置37℃水浴30min,摆荡,使*溶解;
  (3)将已溶解的待测血清沉淀物加至上述包被孔和比力孔中,置37℃60min,洗3次;各孔加底物溶液(OPD—H202)0.ml,37℃20min使呈色。每孔加2mol/LH2S04滴终止反应。置酶标仪492nm测各孔吸光值;
  (4) 标准曲线制备:取正常人血清0.2ml,加热聚合人IsC(20ug/ml)0.2ml,再加PBS0.4ml和5%PEG0.8ml,置4℃ 过夜。同时做不加热聚合人耽的正常血清比力,以排除血清中干扰因素。沉淀清洗同标本把持。用稀释的BSA缓冲液(加等量0.0mol/LpH7.4PBS).6ml溶解并稀释成20、60、30、5、7.5ug/ml,与待测血清同法把持,制成工作标准曲线;
  (5)结果判断:从待测血清吸光度值查标准曲线,即可换算成相当于热聚合人IgG的CIC含量(ug/ml)。以高于正常比力X+2S,即大于28.4ug/ml为阳性。
  3、注意事项
  ()热聚合人IgC应分装贮存于-20℃,不宜反复冻融,否则易解聚;
  (2)PEG的浓度影响CIC沉淀量,须严格配制。

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