真菌细胞凋亡的检测方法
点击次数:1407 更新时间:2016-08-08
细胞凋亡现象的标记主要表现在以下两个方面——形态学变化的特征和细胞内生化和细胞学的应答反应。
①细胞凋亡现象以一系列*的形态学变化定义。
*步明显的变化是细胞收缩及核染色质凝集。然后,伴随着核的裂解形成大量核膜包被的泡状的凋亡体,随后凋亡体被吞噬泡(phagophore)吞噬形成自噬体囊泡。自噬体囊泡外膜与液泡膜融合,自噬体囊泡的内容物以单层膜结构的吞噬小体形式进入液泡的内腔。
随后,吞噬小体及其内容物被液泡内的水解酶降解。整个过程终止于凋亡体在内的分解及细胞组分的再循环。
值得注意的是,尽管细胞凋亡和坏死的机制及形态特征不同,但它们之间存在很多相似处,通常情况下很难以常规的显微镜检将两者区分开来。
②细胞凋亡的鉴定不能仅依赖于细胞形态学特征,还需额外的凋亡特异性标记物的存在。
凋亡细胞主要的生化及细胞学应答反应包括活性氧簇(reactive oxygen specv,ROS)的大量积聚,半胱天冬酶(caspase)的活化,DNA被特殊的内切酶裂解及细胞脂质层中向内构象的磷脂酰发生外翻。
这些变化可被一系列直接或间接的方法检测。但是,必须综合考虑相关优势和劣势来选择不同的检测方法。并不是所有的方式都适用于所有的状况。