PⅢNP Elisa试剂盒RNA酶保护法是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或)与待测的RNA样品液相杂交,标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合,形成双链RNA;未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T消化形成寡核糖核酸,而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA,免受RNA酶的消化,故该方法命名为RNA酶保护实验。
与Northern blot和RT-PCR比较,RPA有以下几个优点:
. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失,使灵敏度下降,而RPA将所有杂交体系进行电泳,故损失小,PⅢNP Elisa试剂盒提高了灵敏度。
2. 由于PCR扩增过程中效率不均一和反应“平台”问题,基于PCR产物量进行分析所得数据的可靠性将下降,而RPA没有扩增过程,因此,分析的数据真实性较高。
3.由于与反义RNA探针杂交的样品RNA仅为该RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA样品仍可进行分析。
4.步骤较少,耗时短。与Northern杂交相比,省去了转膜和洗膜的过程。
5. RNA-RNA杂交体稳定性高,无探针自身复性问题,无须封闭。
6. 一个杂交体系中可同时进行多个探针杂交,无竞争性问题。
7. PⅢNP Elisa试剂盒检测分子长度可以任意设置,灵活性大。RPA的缺点是需要同位素标记探针。