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TSZ Elisa试剂盒模式及具体的实验条
点击次数:988 更新时间:2018-05-22

TSZ Elisa试剂盒封闭是否必要,取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA固相均需封闭,封闭不当反而会使阴性本底增高。一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤*,不经封闭也可得到满意的结果。特别是用单抗腹水直接包被时,因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面,业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中,封闭一般是不可少的(见2.2.2)。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或锡袋中,在低温可保存数月。

 封闭(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低,吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙,封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。*常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用0%的小牛血清或%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂,其的特点是价廉,可以高浓度使用(5%)。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用,但由于奶粉的成份复杂,而且封闭后的载体不易保存,因此在试剂盒的制备中较少应用。
包被用抗原或抗体的浓度,包被的温度和时间,包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在TSZ Elisa试剂盒板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置过夜,37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的*适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化,每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为00ng/ml-20ug/ml。

 酶IgG 人磷脂酰(PS)

 酶相关蛋白IgG 人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)

 酶相关蛋白2IgG 人磷脂酰肌醇IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)

 羟化酶IgG 人磷脂爬行酶(PLSCR)

 酪蛋白激酶γ2IgG 人磷脂酶A2(PL-A2)

 酪蛋白激酶2相互作用蛋白IgG 人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)

 酪酪肽IgG 人磷酸葡萄糖变位酶(PGM) 

 雷帕霉素靶蛋白IgG 人磷酸肌醇3激酶(PI3K)

 雷帕霉素靶蛋白复合体2IgG 人磷酸化乙酰(PaCoA) 
TSZ Elisa试剂盒

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