大鼠ELISA试剂盒每次试验均应同时使用阴性对照血清，可选择强阳性的血清作为标准对照血清，并可自己设定其为00单位（免疫酶单位-EIU）。这样每次试验均参考阳性血清结果确定每份血清的相对抗体水平，其计算公式如下：标本值-阴性对照值  阳性对照值-阴性对照值有此测定（如间接法ELISA试剂盒）需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。

       如果国内或上的标准抗体和检测方法，那么所用的参考血清应与标准血清对照实验进行标准化，但如果所用的检测方法不同，标准化时就存在差别，不同的方法ELISA试剂盒检测出的结果不能反映出参考血清和标准血清之间的差别。无特异抗体的血清稀释阳性血清绘制标准曲线，选择的稀释度应很容易区别阳性。

      抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA试剂盒中似不恰当。