大鼠γ干扰素检测试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的大鼠γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ),再与HRP标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠γ干扰素(IFN-γ)浓度。
代测样本要求注意事项:
. 样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能立即试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
3. 样本应充分离心,不得有溶血及颗粒。
4. 实验严格按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
5. 酶标包被板开封后如未用完,应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
6. 建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测,取平均值,以减小实验误差。
7. 牢记样本已经稀释5倍,计算结果乘以5才是样本实际浓度。
8. 本试剂盒定量范围为75pg/ml-2400pg/ml,超过此范围,为标准曲线延伸计算所得,不做为准确定量结果,请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(75pg/ml-2400pg/ml范围内),乘以总稀释倍数即为样本zui终浓度。
9. 若显色过浅,可适当延长底物温育时间。
0. 为避免交叉污染,标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分,要悬臂加样,不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。
. 试剂盒保质期内使用,不同批号的试剂不得混用。
2. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下