实验开始前，各ELISA试剂盒均应平衡至室温，试剂不能直接在37 溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 00 ，余孔分别加标准品或待测样品00 ，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 00 (临用前配制)，酶标板加上覆膜，37 温育小时。

3.弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡-2分钟，大约400 /每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.每孔加检测溶液B工作液(临用前配制)00 ，加上覆膜，37 温育小时。

5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

6.每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37 避光显色(反应时间控制在5-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止)。
7.每孔加终止溶液50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色，终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。 

8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(值)。