ELISA技术测定仪器、原料和试剂

仪器

聚苯乙烯96孔酶标板、微量移液管、酶联免疫阅读仪、水浴锅。

原料

单克隆抗体

试剂

. 抗原及酶标记抗体

①抗原：兔抗人IgG(Rabbit Aanti-human IgG，Code No.A0423);

②酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP，Code No.P0260);均为

DAKO 公司产品，使用时按照说明书要求稀释。

4. 洗涤液(含0.05%Tween 20的PBS)：LPBS 中加入Tween-20 500μL。

5. 封闭液(含%牛血清白蛋白，0.%Tween 20的PBS)：0mLPBS 中加入00mgBSA，0μLTween-20。

6. 底物溶液

①缓冲液(0.mol/LpH6.0)：称Na2HPO4·2H2O2.2g，NaH2PO4·2H2O 6.84g，用蒸馏水溶解，定容至500mL。

② TMB 贮液：称60mgTMB 溶于0mL 二甲基亚砜中，4℃避光保存。

③底物应用液：现用现配，磷酸钠缓冲液0mL，TNB 贮液0μL。30%H2O2 5μL，混匀。

7. 终止液：2mol/LH2SO4

操作步骤

①抗原包被：兔抗人IgG 作为抗原，用包被液l：8000稀释，00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板

中。4℃放置过一夜。

②洗涤：次日倾去凹孔内的液体，洗涤液洗3次。

③封闭：加l00μL/孔封闭液，室温放置0.5h。

④洗涤：用洗涤液洗3次。

⑤加待测样品(一抗)：将含单克降抗体的细胞培养上清在另—块板上用PBS 连续稀释(按照：2或：0)，00μL /孔加到已包被的板上，每个样品平行做两份，PBS 或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育~2h。

⑥洗涤：用洗涤液洗3次。

⑦加酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP，用封闭液l ：8000稀释，00μL/孔，加盖37℃恒温箱温育h。

⑧洗涤：用洗涤液洗5次，蒸馏水洗2次。

⑨显色：加新鲜配制的底物溶液00μL/孔，室温暗处放置5～30min，显示蓝色。

⑩终止反应、比色：加50μL/孔终止液.颜色变黄;用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值，阳性反应的zui大稀释度为待测样品的效价。

仪器、原料和试剂

仪器

聚苯乙烯96孔酶标板、微量移液管、酶联免疫阅读仪、水浴锅。

原料

单克隆抗体

试剂

. 抗原及酶标记抗体

①抗原：兔抗人IgG(Rabbit Aanti-human IgG，Code No.A0423);

②酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP(Rabbit Anti-mouse IgG-HRP，Code No.P0260);均为

DAKO 公司产品，使用时按照说明书要求稀释。

4. 洗涤液(含0.05%Tween 20的PBS)：LPBS 中加入Tween-20 500μL。

5. 封闭液(含%牛血清白蛋白，0.%Tween 20的PBS)：0mLPBS 中加入00mgBSA，0μLTween-20。

6. 底物溶液

①缓冲液(0.mol/LpH6.0)：称Na2HPO4·2H2O2.2g，NaH2PO4·2H2O 6.84g，用蒸馏水溶解，定容至500mL。

② TMB 贮液：称60mgTMB 溶于0mL 二甲基亚砜中，4℃避光保存。

③底物应用液：现用现配，磷酸钠缓冲液0mL，TNB 贮液0μL。30%H2O2 5μL，混匀。

7. 终止液：2mol/LH2SO4

四、操作步骤

①抗原包被：兔抗人IgG 作为抗原，用包被液l：8000稀释，00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反应板

中。4℃放置过一夜。

②洗涤：次日倾去凹孔内的液体，洗涤液洗3次。

③封闭：加l00μL/孔封闭液，室温放置0.5h。

④洗涤：用洗涤液洗3次。

⑤加待测样品(一抗)：将含单克降抗体的细胞培养上清在另—块板上用PBS 连续稀释(按照：2或：0)，00μL /孔加到已包被的板上，每个样品平行做两份，PBS 或空白培养基作为阴性对照，已知样品作为阳性对照。加盖37℃恒温箱温育~2h。

⑥洗涤：用洗涤液洗3次。

⑦加酶标抗抗体：兔抗鼠IgG-HRP，用封闭液l ：8000稀释，00μL/孔，加盖37℃恒温箱温育h。

⑧洗涤：用洗涤液洗5次，蒸馏水洗2次。

⑨显色：加新鲜配制的底物溶液00μL/孔，室温暗处放置5～30min，显示蓝色。

⑩终止反应、比色：加50μL/孔终止液.颜色变黄;用酶标仪测定450nm 处各孔的吸光值，阳性反应的zui大稀释度为待测样品的效价。