PCR产物纯化之试剂盒回收操作流程如下:
. 取SunShinecleanTM DNA Mini Column 柱裝于2 ml 收集管上(已备)。加入500 μl Buffer B 平衡液至柱子內,室温下0,000 rpm 离心 min,使平衡液*流过柱子。弃去收集管中的平衡液,重新将DNA Mini Column柱装于该收集管上。
2. 将需要纯化的DNA(少于00 ul)置于干净的.5 ml的EP管内,加入300-500 ul Buffer K,充分混匀。
(注:一些PCR产物可能含有石蜡油,石蜡油可能会导致回收率降低。因此我们建议将石蜡油尽量清除。)
3. 将混合液转移到一步已经平衡的柱子里面,室温放置2 min,0,000 rpm离心 min。
4. 弃去收集管中的滤液,将柱子装回2 ml收集管内,加入700 μl Buffer W(已用70%乙醇溶解的)至柱子中。室温下0,000 rpm离心 min。
(注:浓缩的Buffer W在使用之前请用70%乙醇溶解。)
5. 重复步骤4一次。
6. 弃去收集管中的滤液,将柱子装回2 ml收集管内。室温下,2,000 rpm离心2 min以甩干柱子基质残余的液体。
(注:省去这一步将导致残留乙醇于DNA中。)
7. 把柱子装在一个干净的.5 ml离心管上,加入0-50 μl(具体取决于预期的终产物浓度)Buffer E(可用超纯水或TE缓冲液代替)到柱基质的膜,室温放置0.5- min,2,000 rpm离心 min以洗脱DNA。di一次洗脱可以洗出80%以上的结合DNA。如果再洗脱一次的话,可以把残余的DNA洗脱出来。