灭鲑气单胞菌PCR定量试剂盒阳性对照反应体系
点击次数:796 更新时间:2020-05-21
灭鲑气单胞菌PCR定量试剂盒阳性对照反应体系:
a)模板DNA:选用样本纯化的DNA。
b)引物的选择:建议选择该样本较易扩增的基因的引物,如 β-actin 基因或 GAPDH 等。
4.2 阴性对照
PCR反应体系被污染会导致PCR结果出现假阳性,需要设置阴性对照来排除。将使用的移液器枪头浸泡在2× Blood Master Mix中,添加引物,ddH2O进行PCR扩增;另取ddH2O作为模板,用目的基因引物进行PCR扩增,以排除PCR体系是否被污染和实验是否有其他污染源。
注意事项
. 尽量使用新鲜抗凝血。若冻存血,应避免反复冻融。
2. 解冻后2× Blood Master Mix可能出现浑浊,冰上放置-2 min,待溶液澄清后,上下颠倒混匀,不影响试剂性能。
3. 电泳检测时,切勿使用含有 SDS 的Loading Buffer,否则在电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度 kb以内,以便扩增效率*。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。