三日疟原虫LAMP试剂盒检测程序:
. 加样:每孔各加入标准品或待测样品 00ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 20 分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入抗体工作液0 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液00ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液00ul ,置 37 ℃ 暗处反应5 分钟。
8. 每孔加入00ul 终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
操作步骤:
:样品准备:取毫升细胞培养上清(贴壁和悬浮细胞都可以,*已培养48小时以上),在6000g离心5分钟,小心弃去上清,避免丢失沉淀(沉淀量有可能很少,目视看不到)。将沉淀用无菌PBS重悬,在6000g离心5分钟,同样小心弃去上清,如此反复用无菌PBS洗三次。*将获得的沉淀用00微升超纯水重悬,置于00℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存到2个月。
2:PCR反应的准备:
待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,戴,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。