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田鼠分枝杆菌PCR检测试剂盒反应五要素
点击次数:588 更新时间:2021-03-30

田鼠分枝杆菌PCR检测试剂盒反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 5-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至0kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.~umol或0~00pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

犬血栓素B2(TXB2)elisa检测试剂盒
犬血栓前体蛋白(TpP)elisa检测试剂盒
犬血栓调节蛋白(TM)elisa检测试剂盒
犬血清淀粉样蛋白A2(SAA2)elisa检测试剂盒
犬血清淀粉样蛋白A(SAA)elisa检测试剂盒
犬血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)elisa检测试剂盒
犬血管紧张素转化酶2(ACE2)elisa检测试剂盒
犬血管紧张素转化酶(ACE)elisa检测试剂盒
犬血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)elisa检测试剂盒
犬血管紧张素-7(Ang-7)elisa检测试剂盒
犬α(Thymosin α)elisa检测试剂盒
犬胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)elisa检测试剂盒
犬胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL7)elisa检测试剂盒
犬心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)elisa检测试剂盒
犬心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)elisa检测试剂盒
犬心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)elisa检测试剂盒
犬纤溶酶原激活物抑制剂(SERPINE)elisa检测试剂盒
犬细小病毒(PV)抗体(IgG)elisa检测试剂盒
犬细胞间粘附分子(ICAM-/CD54)elisa检测试剂盒

 

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