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丙酮酸脱氢酶(PDH)​操作步骤
点击次数:1386 更新时间:2021-08-26

丙酮酸脱氢酶(PDH)操作步骤:

. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔0孔,在di一、第二孔中分别加标准品00μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取00μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品0μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7. 温育:操作同3。

8. 洗涤:操作同5。

9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色5分钟.

0. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后5分钟。

内皮细胞活化蛋白受体抗体

效应细胞蛋白酶受体抗体

早期内吞体相关蛋白抗体

胞吞调控蛋白Eps5抗体

真核翻译起始因子4E抗体

核输出蛋白5抗体

肠致病性大肠杆菌抗体

E4F转录因子抗体

睾酮调节细胞凋亡诱导和肿瘤抑制基因抗体

聚合酶延伸因子2抗体

聚合酶延伸因子抗体

神经生长因子调控抑制蛋白抗体

内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体抗体

红细胞分化相关因子抗体

微管相关蛋白样蛋白3抗体

内皮抑素/内皮他丁抗体

雌激素受体β抗体

雌激素受体α抗体

内质网Aβ相关结合蛋白抗体

Ephrin A2抗体

大肠埃希菌菌体蛋白抗体

雌激素硫酸转移酶抗体

E Tag标签抗体

登革热病毒包膜糖蛋白E抗体

食道癌相关基因抗体


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