Elisa试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。国内医学检验一般均用板式点。
 

　　Elisa试剂盒的操作步骤：
 

　　方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
 

　　. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为～0μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
 

　　2. 加样：加一定稀释的待检样品0.ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
 

　　3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.ml。37℃孵育0.5～小时，洗涤。
 

　　4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分钟。
 

　　5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
 

　　6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：小鼠ELISA试剂盒反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或较浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则40nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.倍，即为阳性。
 

　　方法二 用于检测未知抗体的间接法：
 

　　用包被缓冲液将已知抗原稀释至～0μg/ml，每孔加0.ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标二抗体(抗抗体)0.ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
 

　　洗涤：
 

　　洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，ELISA试剂盒但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中，洗涤是zui主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎。