小鼠Smad7 elisa检测试剂盒操作步骤:
. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔0孔,在di一、第二孔中分别加标准品00μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取00μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品0μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色5分钟.
0. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后5分钟。
人胃癌细胞;MKN-45
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞;MuM-2B
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞;MuM-2C
人肺粘液上皮样癌细胞;NCI-H292
人低侵袭性脉络膜黑色素素瘤细胞;OCM-A
人胃腺癌细胞;SGC-790 [SGC790]
人低分化肺腺癌细胞;SK-LU-
人乳腺导管癌细胞;ZR-75-30
人急性T淋巴细胞性白血病细胞;I 2.(CRL-2572)
人膀胱癌细胞;5637(HTB-9)
人肾透明细胞腺癌细胞;786-O [786-0]
人肾透明细胞癌;Caki-
人胰腺导管癌细胞;CFPAC-
人食管癌细胞;EC09
人结直肠腺癌细胞;HCT-5 [HCT5]
人结直肠腺癌细胞;LS 74T [LS74T]
人乳腺癌细胞;MDA-MB-468
人肺支气管癌细胞;NCI-H650
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H975
人非小细胞肺腺癌细胞;NCI-H2087
人小细胞肺癌;NCI-H2227
人非小细胞肺癌细胞;NCI-H23
人肾上腺皮质腺癌细胞;NCI-H295R
小鼠源细胞
小鼠胚胎成纤维细胞;3T3-Swiss albino
小鼠T淋巴细胞瘤细胞;Cyc-Tag(S49)
小鼠骨髓细胞;FDC-P
小鼠垂体瘤细胞;GT-
小鼠胚胎成骨细胞前体细胞;MC3T3-E
小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3
小鼠睾丸畸胎瘤细胞;P9
小鼠胚胎成纤维细胞(来自NIH3T3);PA2
小鼠血细胞;WEHI-3 [WEHI3]
小鼠成纤维细胞;φ2
小鼠红白血病细胞;MEL
小鼠骨髓瘤细胞;Sp2/0-Ag4
小鼠垂体瘤细胞(分泌促生长激素分泌激素);AtT-20
小鼠小胶质细胞;BV2
小鼠骨髓瘤细胞;Fox-NY
小鼠胚胎成纤维细胞;MEF