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质谱兼容型蛋白磷酸酶抑制剂混合液反应五要素
点击次数:521 更新时间:2022-03-01

质谱兼容型蛋白磷酸酶抑制剂混合液反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

内皮细胞分化G蛋白偶联受体8抗体

神经细胞鸟苷酸置换因子NGEF抗体

磷酸化真核启动因子2α抗体

长链脂肪酸延长酶ELOVL2抗体

长链脂肪酸延长酶长ELOVL5抗体

有脊椎动物脑发育相关蛋白Emx1抗体

外胚层神经皮层蛋白1抗体

烯醇化酶超家族成员1抗体

核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗体

内皮细胞活化蛋白受体抗体

效应细胞蛋白酶受体1抗体

早期内吞体相关蛋白1抗体

胞吞调控蛋白Eps15抗体

真核翻译起始因子4E抗体

核输出蛋白5抗体

肠致病性大肠杆菌抗体

E4F转录因子1抗体

睾酮调节细胞凋亡诱导和肿瘤抑制基因抗体

聚合酶延伸因子2抗体

聚合酶延伸因子抗体

神经生长因子调控抑制蛋白抗体

内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体1抗体

红细胞分化相关因子1抗体

微管相关蛋白样蛋白3抗体

内皮抑素/内皮他丁抗体

雌激素受体β抗体


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