TSZ Elisa试剂盒本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人环加氧酶-2（COX-2）水平。用纯化的人环加氧
酶-2（COX-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入环加氧酶
-2（COX-2），再与HRP 标记的环加氧酶-2（COX-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，
经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下
转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的环加氧酶-2（COX-2）呈正相关。用酶标仪在450nm
波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人环加氧酶-2（COX-2）浓度。
人环加氧酶-2（COX-2）Elisa试剂盒试剂盒组成
30 倍浓缩洗涤液 20ml× 瓶 7 终止液 6ml× 瓶
2 酶标试剂 6ml× 瓶 8 标准品（40ng/ml） 0.5ml× 瓶
3 酶标包被板 2 孔×8 条 9 标准品稀释液 .5ml× 瓶
4 样品稀释液 6ml× 瓶 0 说明书 份
5 显色剂A 液 6ml× 瓶 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×/瓶 2 密封袋 个
人环加氧酶-2（COX-2）Elisa试剂盒标本要求
．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
TSZ Elisa试剂盒操作步骤
. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
20 ng/ml 5 号标准品 50μl 的原倍标准品加入50μl 标准品稀释液
0 ng/ml 4 号标准品 50μl 的5 号标准品加入50μl 标准品稀释液
5 ng/ml 3 号标准品 50μl 的4 号标准品加入50μl 标准品稀释液
2.5 ng/ml 2 号标准品 50μl 的3 号标准品加入50μl 标准品稀释液
.25 ng/ml 号标准品 50μl 的2 号标准品加入50μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品0μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
5 分钟.
0. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 TSZ Elisa试剂盒测定应在加终止
液后5 分钟以内进行。