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TSZ Elisa试剂盒实验时显色可能碰到的问题以及解决办法
点击次数:785 更新时间:2017-10-09

TSZ Elisa试剂盒实验时的操作步骤有标准品的稀释、加样、温育、洗涤、显色等等,然而在显色这一步骤可能碰到的问题有:
、显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2、加显色剂时溅出孔外造成液体回流。
相应解决办法:
、显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用;
2、加样时保持显色剂不外流;
3、A、B液应避免接触金属器械。
显色是elisa实验的zui后一步温育反应,所以显色也是重要步骤之一。
标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔0孔,在*、第二孔中分别加标准品00μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取00μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为36 pg/mL,24 pg/mL ,2 pg/mL,6 pg/mL,3 pg/mL)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品0μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色5分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
TSZ Elisa试剂盒测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。
CDGG-03954-0    5000mg/L;ml    三聚氰suan(氰尿suan)    CDGG-033320-03-00    00mg/L;00ml    DCAA Methyl Ester
CDGG-03958-02    000mg/L于叔丁基甲mi,ml    缩二脲    CDGG-03332-03-00    00mg/L;00ml    2,3-二lv丙suan甲酯 标准品
CDGG-03206-02    000mg/L;ml    双氰胺(二聚氰胺,氰基胍) Di...    CDGG-033322-03-00    00mg/L;00ml    2,4-二溴
CDGG-032037-02    2000mg/L;ml    倍硫磷亚砜    CDGG-033684-05    00mg/L;ml    苯mi甲环唑/恶mi唑
CDGG-032043-06    00mg/L;ml    倍硫磷砜    CDGG-033685-05    00mg/L;ml    乙硫苯威
CDGG-032047-0    0mg/L;ml    禾草灵(自由suan)    CDGG-033690-03    00mg/L;ml    环唑醇
CDGG-032048-05-0    0mg/L;2x5ml    欧盟7种邻苯二甲suan酯混标(DEH...    CDGG-0034-05-4PAK    500mg/L和5000mg/L(DIDP,DINP,DIBP)于二lv甲烷,4*ml,-0度存放    氟虫腈
TSZ Elisa试剂盒

 

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