一、在采集样品和分离血清时,应尽可能避免细菌污染.在一种情况下,细菌分泌的一些酶可能分解抗原和抗体等蛋白质；一些内生酶,如大肠杆菌中的?-半乳糖苷酶,会干扰以相应酶标记的测定方法.

　　二、如果用无菌手术分离血清样本,可在2℃保存一周,如果酶联免疫吸附试验灭菌,建议冷冻保存,样品应保存在-70℃以下.

　　三、冰冻血清样本应注意避免因断电等引起的反复冻融,反复冻融产生的机械剪切力会破坏样品中的蛋白质和其他分子,造成假阴性结果.此外,冻融标本混合也要小心,不要剧烈振荡,反复反混合.

　　四、应注意避免严重的溶血.血红蛋白含有类似过氧化物的血红素基团,因此,在测定HRP作为标记酶时,如果血清样品中血红蛋白浓度较高,则在孵育过程中容易吸附到固相,因此与HRP底物发生反应.

　　五、用细菌污染引起的混浊或絮体保存样品时,应离心沉淀,然后取涂片进行检测.

　　ELISA试剂盒是以免疫反应为基础,将抗原和抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用结合起来的一种高度灵敏的检测技术.由于抗原和抗体的反应是在聚苯乙烯微滴定板的孔内进行的,所以添加的每一种试剂都可以通过洗涤去除多余的游离反应物,从而保证检测结果的特异性和稳定性.用双抗体夹心法测定样品水平,用微孔板包覆纯化抗体制成固相抗体,将固相抗体依次添加到单克隆抗体包被的微孔中,再与HRP标记的抗体结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,*洗涤后加入底物TMB进行抗体开发.在HRP酶催化下将ELISA试剂盒TMB转化为蓝色,在酸性作用下转化为Zui终黄色,颜色深度与样品呈显著正相关,酶标仪在450 nm波长处测定吸光度（OD值）,用标准曲线计算样品浓度.