小鼠尿道上皮细胞培养试剂盒说明书

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小鼠尿道上皮细胞培养试剂盒【Human Bone PrimacellTM：Osteblasts】
     小鼠尿道上皮细胞培养试剂盒说明书尿道是从膀胱通向体外的管道。其中，人尿道上皮细胞传5代以上仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。 虽然尿道上皮组织机械韧性很强，但利用本公司试剂盒中提供的尿道上皮组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的薄的尿道上皮组织片能使得尿道上皮组织中细胞的一些功能特性发生改变，从而将尿道上皮细胞分离开来。

本试剂盒适用于分离培养小鼠尿道上皮细胞。本体系提供了佳的组织分离条件，分离单个细胞的效率是已出版文献中所报道的5~6倍。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以大程度地降低所培养的尿道上皮原代细胞中成纤维细胞的含量。 小鼠尿道上皮细胞培养试剂盒适合于培养小鼠的尿道上皮细胞。本试剂盒包含： （）OptiTDSTM小鼠尿道上皮细胞组织解离液 (3×ml) （2）小鼠尿道上皮细胞组织处理缓冲液 (00ml) （3）FibrOutTM小鼠尿道上皮细胞成纤维抑制剂(ml（500x）) （4）小鼠尿道上皮组织洗液(5 x 00 ml) （5）小鼠尿道上皮细胞生长因子（ml500x）及血清（5x0ml） （6）小鼠尿道上皮细胞基础培养基(5 x 00ml) （7）小鼠尿道上皮组织预备液 ( x 00 ml) （8）小鼠尿道上皮细胞培养试剂盒使用说明书
培养步骤：
小鼠尿道上皮细胞培养试剂盒说明书对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按：2到：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。​

人脐静脉平滑肌细胞*培养基人腺成纤维细胞*培养基

牛舌菌、肝色牛排菌 Fistulina hepatica酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

小鼠胰岛素瘤细胞大豆慢生根瘤菌

葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum人骨髓间充质干细胞（hMSCs）

干酪杆菌 Lactobacillus casei异常汉逊酵母 Hansenula anomala

Beta-TC-6(小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞)大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

酒假丝酵母 Candida kefyrCOS-7(非洲绿猴SV40转化的肾细胞)

豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum皱褶假丝酵母 Candida rugosa

MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞植物杆菌 Lactobacillus plantarum

丁酸梭菌 Clostridium butylicumEBV-转化人淋巴细胞

小鼠尿道上皮细胞培养试剂盒说明书(S)-3-甲酸甲酯盐酸盐分子式：65.6798英文名称：(S) -3- methyl piperidine hydrochloride：分子量： C6H2ClNO2

2--3-氟吡分子式：2.英文名称：2- amino -3-：277-95-3分子量： C5H5FN2

异辛酸钾分子式：英文名称：Potassium potassium：3594-75-3分子量：

2,5-二羟磺酸钾分子式：228.26英文名称：2,5- two hydroxy benzene sulfonic acid：2799-87-分子量： C6H5KO5S

2-丁-3-(4-羟甲酰)-5-硝并呋喃分子式：339.34英文名称：2- butyl -5- (4- hydroxy group) -3- nitrobenzene and the：4645-6-分子量： C9H7NO5

(R)--Boc-3-氨甲分子式：24.3英文名称：(R) --Boc-3- ammonia methyl piperidine：40645-23-4分子量： CH22N2O2

十三烷分子式：260.46英文名称：Thirteen benzene：23-02-4分子量： C9H32

N-丙咪唑分子式：08.4英文名称：N- vinyl：340-0-2分子量： C6H8N2

,3-二亚并异吲哚啉分子式：95.23英文名称：,3- two amino benzene and ISO：65558-69-2分子量： C2H9N3

赤藓红英文名称：Erythrosine分子式：879.86分子量： C20H6I4Na2O5：568-63-8

注意事项：
. 接收到小鼠尿道上皮细胞培养试剂盒说明书，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞00X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。