大鼠直肠平滑肌细胞培养试剂盒说明书

注意事项：
. 接收到大鼠直肠平滑肌细胞培养试剂盒说明书，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞00X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

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大鼠直肠平滑肌细胞培养试剂盒【Rat Intestine PrimacellTM：Normal Rectal Smooth Muscle Cells】
     大鼠直肠平滑肌细胞培养试剂盒说明书平滑肌收缩是胃肠蠕动中基本的运动方式。肠炎时由于平滑肌特殊肌动蛋白的增加导致了平滑肌层的增厚。平滑肌肌动蛋白可能影响收缩力的产生，这进一步证明了炎症时的肠平滑肌细胞具有可塑性。利用肠平滑肌细胞的培养，可以帮助了解收缩、增殖和胃肠道结缔组织对平滑肌细胞的反应。 虽然直肠组织机械韧性很强，但利用本公司试剂盒中提供的直肠组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的薄的直肠组织片能使得直肠组织中成直肠细胞的一些功能特性发生改变，从而将成直肠细胞分离开来。

本试剂盒适用于分离培养新生儿或成年人的成直肠细胞。本体系提供了佳的组织分离条件，分离单个细胞的效率是已出版文献中所报道的5~6倍。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以大程度地降低所培养的成直肠原代细胞中成纤维细胞的含量。 大鼠直肠平滑肌细胞培养试剂盒适合于培养人的成直肠组织细胞。本试剂盒包含： （）OptiTDSTM大鼠直肠平滑肌细胞组织解离液（3×ml） （2）大鼠直肠平滑肌细胞组织处理缓冲液（00ml） （3）FibrOutTM大鼠直肠平滑肌细胞成纤维抑制剂（ml（500x）） （4）大鼠直肠平滑肌组织洗液（5x00 ml） （5）大鼠直肠平滑肌细胞生长因子（ml 500x）及血清（5x0ml） （6）大鼠直肠平滑肌细胞基础培养基（5 x00ml） （7）大鼠直肠平滑肌组织预备液（ x00 ml） （8）大鼠直肠平滑肌细胞培养试剂盒使用说明书​

赭色掷孢酵母 Sporobolomyces salomonicolor

百脉根根瘤菌 Rhizobium loti

P85(小鼠肥大细胞瘤细胞)5×06cells/瓶×2

双孢蘑菇

(含00mL 酶解缓冲液)0mL

小鼠淋巴管内皮细胞*培养基00mL

植物杆菌 Lactobacillus plantarum

费氏中华根瘤菌 Sinorhizobium fredii

MOLT-4全细胞裂解液00μg

覃状青霉 Penicillium paxilli

大鼠直肠平滑肌细胞培养试剂盒说明书2-氟甲砜分子式：90.65英文名称：2- phenyl methyl group：7205-98-3分子量： C7H7ClO2S

双(五甲环戊二)锰分子式：325.39英文名称：Double (five methyl cyclopentadienyl manganese)：67506-86-9分子量： C20H30Mn 0*

邻二甲二丙酯（DPRP）英文名称：The adjacent benzene two formic acid two (DPRP).分子式：250.29分子量： C4H8O4：3-6-8

5--2-溴-3-氯吡分子式：207.46英文名称：5- amino -2- -3-：30284-52-5分子量： C5H4BrClN2

4-氯-6-乙氧喹啉分子式：英文名称：4- -6-, ethyl：03862-63-分子量： CH0ClNO

性红289英文名称：Acid red 289分子式：676.73373分子量： C35H29N2NaO7S2：2220-28-9

氟铜分子式：0.54英文名称：氟铜：7789-9-7分子量： CuF2

2,3-二甲溴分子式：85.06英文名称：Two - methyl 2,3-：576-23-8分子量： C8H9Br

曲美孕酮英文名称：QuMei progesterone分子式：342.47分子量： C22H30O3：7453-62-5

炔诺肟酯英文名称：Acetylene and the分子式：369.5分子量： C23H3NO3：3589-28-7

培养步骤：
大鼠直肠平滑肌细胞培养试剂盒说明书对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按：2到：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。