人椎间盘髓核细胞提取物培养

注意事项：
. 接收到人椎间盘髓核细胞提取物培养，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞00X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

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人椎间盘髓核细胞提取物【Human Intervertebral Disc: Normal Nucleus Pulposus Cell Derivatives】
     人椎间盘髓核细胞提取物培养人椎间盘髓核细胞提取物是从人椎间盘髓核细胞提取的，人椎间盘髓核细胞从正常人椎间盘髓核组织制备。正常人椎间盘髓核组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。        cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA*链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及0mg总RNA。68℃反应0min 后终止RT反应。利用x RT Buffer 运输cDNA， μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。        蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。        潜在的应用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。​

ERCC8 / CSA 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IF   ICC/IF   50 µg

IL-27 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

FOXJ 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

CD3 / PECAM 抗體 (PE), 鼠單抗 FCM    25 Test

TUBG 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 µg

UBE2D / UBCH5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB    50 µg

PFD2 / PFDN2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB   IP   50 µg

TNFRSFA 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

CD9 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

PI3 / Elafin / WFDC4 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

人椎间盘髓核细胞提取物培养专蓝5号钠盐英文名称：Patent blue 5分子式：582.66分子量： C27H3N2NaO7S2：20262-76-4

表没食子儿茶素没食子酯英文名称：Epigallocatechin-3-gallate分子式：458.3772分子量：C22H8O：989-5-5

8-姜酚英文名称：8- ginger phenol分子式：322.44分子量： C9H30O4：30462-35-2

8-硝喹哪分子式：88.9英文名称：8- nitro group：88-07-2分子量： C0H8N2O2

2--5-三氟分子式：287.02英文名称：2- amino -5- three f：97760-97-9分子量： C7H5F3IN

2,6-二氯三氟甲分子式：英文名称：2,6- two CL three：分子量：

6--2-甲喹啉分子式：58.2英文名称：6- amino -2- methyl group：65079-9-8分子量： C0H0N2

,5-萘二磺钠英文名称：,5- naphthalene two sulfonic acid分子式：332.25334分子量： C0H6Na2O6S2：655-29-4

2--3-氟吡分子式：22.英文名称：2- cyano -3- fluorine pyridine：97509-75-6分子量： C6H3FN2

,2-二溴乙分子式：263.96英文名称：,2- styrene dibromide：93-52-7分子量： C8H8Br2

培养步骤：
人椎间盘髓核细胞提取物培养对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按：2到：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。