小鼠肾小管上皮细胞提取物培养

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产品描述：
小鼠肾小管上皮细胞提取物【Mouse Kidney: Normal Renal Tubular Derivatives】
     小鼠肾小管上皮细胞提取物培养小鼠肾小管上皮细胞提取物是从小鼠原代肾小管上皮细胞提取的，小鼠原代肾小管上皮细胞从正常小鼠肾小管组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。        cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA*链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及0mg总RNA。68℃反应0min 后终止RT反应。利用x RT Buffer 运输cDNA， μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。        蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。        潜在的应用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
技术传授:
冻存培养基
小鼠肾小管上皮细胞提取物培养冻存细胞时必须使用的冻存培养基。冻存培养基中应含有 DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的*冻存培养基。
）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型*冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优化，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 
2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含0% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。
培养细胞冻存方案
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需*培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约00-200×g的离心力将细胞悬液离心5至0分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低  °C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
以下是小鼠肾小管上皮细胞提取物培养的相关产品：

GJA 抗體, 兔單抗 IHC-P    50 µg

Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 抗體 (PE), 兔單抗 FCM    25 Test

HSP27 / HSPB 抗體, 兔單抗 FCM   IF   ICC/IF   50 µg

Cystatin 7 / CST7 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

IL8RAP 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB    50 µg

人 Serum Albumin / HSA / ALB 抗體 (FITC), 兔單抗 FCM   IF   ICC/IF   25 Test

RCAS / EBAG9 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µg

SRGN / serglycin 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB    50 µg

IL-5 / IL5 / Interleukin 5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB    50 µg

PI3 / Elafin / WFDC4 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

小鼠肾小管上皮细胞提取物培养4-Hydroxyquinoline 4-羟基喹啉 5g  瓶

羊抗小鼠IgG mg  支

Scopolamine butylbromide 丁溴酸东莨菪碱 49-64-4  20mg

Bis Benzlimide Hoechst NO33342 荧光染料 25mg  支

50ml离心管，20包-箱 25支  包

Sodium 5-nitroguaiacolate 5-硝基愈创木酚钠 25g  瓶

兔抗猴IgG（免疫血清） 5ml  支

D-Ribose D-核糖 50-69-  00mg

20×SSPE PH7.4 00ml  瓶

Benzaldehyde 苯 00-52-7  0.5mL

L-Cysteine L-半 52-90-4  200mg

细胞可重发跟不可重发：
可以重发的情况有哪些？
（）细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、破损、漏液等，重发；
（2）冻存的细胞复苏后，绝大多数细胞未存活，重发；
（3）存活的细胞静置24小时后，绝大多数细胞未存活，重发；
（4）冻存的细胞复苏后或存活的细胞静置4小时后并且未开封，出现污染，重发；
（5）视具体情况而定。
小鼠肾小管上皮细胞提取物培养出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）细胞状态不好，未细胞培养前3天照片的，不重发；
（4）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（5）细胞收到2天内，未告知，不重发；