大鼠肺泡上皮细胞提取物培养

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大鼠肺泡上皮细胞提取物 【Rat Lung: Normal Alveolar Epithelial Cell Derivatives】
     大鼠肺泡上皮细胞提取物 培养大鼠肺泡上皮细胞提取物是从大鼠肺泡上皮细胞提取的，大鼠肺泡上皮细胞从正常大鼠肺组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。        cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA*链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及0mg总RNA。68℃反应0min 后终止RT反应。利用x RT Buffer 运输cDNA， μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。        蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。        潜在的应用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。
培养步骤：
大鼠肺泡上皮细胞提取物 培养对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按：2到：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。​

RELT / TNFRSF9L 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

CD80 / B7- 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB  IHC-P    50 µg

TNF-alpha / TNFA / TNFSF2 抗體, 兔單抗 FCM    50 µg

PRDM2 / RIZ 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   IHC-P    50 µg

Cadherin-7 / LI-cadherin / CDH7 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

gp30 / CD30 / IL6ST 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

CEACAM5 / CD66e 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg

UBE4A 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 µg

CD85c 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 µg

SLITRK 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

大鼠肺泡上皮细胞提取物 培养化羊抗小鼠IgG 0.ml  支

Hippuric acid 马尿酸 25g  瓶

M DTT ml  瓶

DL-Homocysteine DL-高半 454-29-5  25mg

革兰氏阳性菌质粒大量提取试剂盒 0T  盒

牛脏器组织淋巴细胞分离液试剂盒 200ml/KIT  盒

L-Tyrosine L- 25g  瓶

Chitohexaose 6HCl 壳六糖 4708-95-6  0mg

甲苯胺蓝溶液 00ml  瓶

核酸助沉剂 ml  瓶

D(+)-Xylose D(+)木糖 5g  瓶

注意事项：
. 接收到大鼠肺泡上皮细胞提取物 培养，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞00X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。