宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物说明书

注意事项：
. 接收到宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物说明书，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞00X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。 

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宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物【Human Cervix MatchPair?: Normal Cervix Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】
     宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物说明书人宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人宫颈上皮细胞和肿瘤细胞中提取的，人宫颈上皮细胞和肿瘤细胞分别从正常人宫颈组织和肿瘤组织中制备。正常人宫颈组织和肿瘤组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。        cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA*链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及0mg总RNA。68℃反应0min 后终止RT反应。利用x RT Buffer 运输cDNA， μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。        蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。        潜在的应用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。​

兔抗CTNNA (Phospho-Ser64) 多克隆抗体 英文名：Anti-CTNNA (Phospho-Ser64) rabbit

兔抗AKT/AKT2/AKT3 (phospho-Tyr35/36/32)多克隆抗体 英文名：Anti-AKT/AKT2/AKT3 (phospho-Tyr35/36/32) rabbit polyclonal

兔抗AKT (phospho-Thr450)多克隆抗体 英文名：Anti-AKT (phospho-Thr450) rabbit polyclonal

兔抗MAPK8/MAPK9/MAPK0 (phospho-Thr83/Tyr85)多克隆抗体 英文名：Anti-MAPK8/MAPK9/MAPK0 (phospho-Thr83/Tyr85) rabbit polyclonal

兔抗ERBB3 (phospho-Tyr328)多克隆抗体 英文名：Anti-ERBB3 (phospho-Tyr328) rabbit polyclonal

兔抗EIF4G (phospho-Ser232)多克隆抗体 英文名：Anti-EIF4G (phospho-Ser232) rabbit polyclonal

兔抗HAC4/HAC5/HAC9 (phospho-Ser246/259/220)多克隆抗体 英文名：Anti-HAC4/HAC5/HAC9 (phospho-Ser246/259/220) rabbit polyclonal

兔抗PLCG (phospho-Tyr77)多克隆抗体 英文名：Anti-PLCG (phospho-Tyr77) rabbit polyclonal

兔抗ABL/ABL2 (phospho-Tyr393/439)多克隆抗体 英文名：Anti-ABL/ABL2 (phospho-Tyr393/439) rabbit polyclonal

兔抗KR (phospho-Tyr059)多克隆抗体 英文名：Anti-KR (phospho-Tyr059) rabbit polyclonal

兔抗STAT2 (phospho-Tyr690)多克隆抗体 英文名：Anti-STAT2 (phospho-Tyr690) rabbit polyclonal

兔抗LCK (phospho-Tyr505)多克隆抗体 英文名：Anti-LCK (phospho-Tyr505) rabbit polyclonal

宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物说明书Capsanthin 辣椒红-辣椒红素 25g  瓶

pET-32a(+) 0ug  支

Sennoside A 番泻苷A 8-27-6  20mg

β-Lactoglobulin from bovine milk β-乳球蛋白 来源于牛奶 00mg  瓶

一次性接种环 ul（蓝色） 0支  包

Chromeazurol S 铬天青S 0g  瓶

L-Homoserine L-高 5g  瓶

细胞过滤筛(不锈钢) 40目  个

Acid Yellow 23 酒石黄-柠檬黄-酸性黄23 934-2-0  250mg

Chalcone 查尔酮 94-4-7  20mg

3,3'-Diaminobenzidine 3,3'-二氨基二苯胺 g  瓶

培养步骤：
宫颈上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物说明书对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按：2到：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按：2到：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。